dpph法(Dpph法测定黄芩黄酮的抗氧化活性)

来源：互联网时间：2026-09-29 00:12:52 浏览量：14

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DPPH法于1958年被提出，广泛用于定量测定生物试样、纯化合物、提取物的体外抗氧化能力。

DPPH清除法的原理

作为一种稳定的自由基，DPPH能在有机溶剂中稳定存在，其醇溶液呈紫色，且需低温避光储藏，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关DPPH清除法的缺陷

由于DPPH是亲脂的，因而，缺乏生物相关性。PTIO自由基清除法被认为是理想的替代法。此法既可在水溶液中、也可以在pH7.4缓冲溶液中进行。

dpph自由基清除原理：

DPPH自由基有单电子在517nm处有一强吸收其醇溶液呈紫色的特性，结论， DPPH法名称:1，它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍。

中文名：22联氮二(3乙基苯并噻唑6磺酸)二铵盐别名：22’连氮基双(3乙基苯并二氢噻唑啉6磺酸)分子式：C18H24N6O6S4分子量：54868ABTS法是使用最广泛的间接检测方法，当有自由基清除剂存在时由于与其单电子配道对而使其吸收逐渐消失其褪色程与其接受的。

dpph性质应用：

DPPH具有几个不同结晶形态，它们的晶格对称性和熔点(m.p.)存在差异。商品化的粉末是不同晶相的混合物，熔点在130℃附近。DPPH-Ⅰ(m.p. 106℃)是正交晶系，DPPH-Ⅱ(m.p. 137℃)是无定形态，DPPH-Ⅲ(m.p. 128-129℃)是三斜晶系。

DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自3个苯环的ππ共-轭作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。作为一种稳定的自由基，DPPH可以捕获("清除")其他的自由基。

因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。由于DPPH自由基在以300~400之间为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。

利用这一特性可以直观地检测反应的过程，通过记录DPPH在在520nm吸光度值或者EPR信号的变化可以得到初始自由基的量。

DPPH法是一种常用的测定食品、药品等样品抗氧化性的方法。其原理是基于DPPH自由基与抗氧化剂的反应，通过比较DPPH自由基还原前后的吸光度变化来评估样品的抗氧化能力。

DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其分子中包含一个未成对电子，具有很强的吸收能力。当DPPH与抗氧化剂发生反应时，未成对电子被转移给抗氧化剂，DPPH自由基减少而呈现出淡黄色或无色，吸光度也随之降低。通过测定反应前后DPPH自由基的吸光度差异，可以计算出样品的抗氧化能力。

DPPH法的具体实验步骤如下：

准备样品：将待测样品溶解或悬浮在适当的溶剂中，以便进行后续的反应。

预处理DPPH溶液：将DPPH粉末溶解在适当的溶剂中，使得其吸光度在515 nm左右为1.0 ± 0.1。

反应：将待测样品加入预处理好的DPPH溶液中，使其充分反应。

测定吸光度：将反应后的混合液吸入分光光度计中，测定其在515 nm处的吸光度。

计算抗氧化能力：通过比较反应前后DPPH溶液的吸光度差异，计算出样品的抗氧化能力。

通常情况下，样品的抗氧化能力越强，其与DPPH反应后DPPH溶液的吸光度下降越大，吸光度差值越大。因此，DPPH法可以用于快速评估不同食品、药品等样品的抗氧化能力，并可以用于筛选和优选具有较强抗氧化能力的物质。

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